熒光-PCR法不同于其他PCR的地方在于PCR過程中利用熒光染料在光刺激下釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴增產(chǎn)物量的變化，熒光信號變量與擴增產(chǎn)物變量成正比，并通過足夠靈敏的自動化儀器實現(xiàn)對熒光的采集和分析以達到對原始模板量定量的目的。
熒光基團通常各自擁有單一的光吸收峰。在光的刺激下，熒光基團吸收光的能量后通常以三種方式釋放出能量：
1.光能：許多熒光基團吸收光能后仍舊以光能形式釋放能量，并且發(fā)射光的峰值大于吸收峰。
2.熱能：某些熒光基團吸收光能后，能量轉(zhuǎn)換為熱量擴散到環(huán)境中。
3.轉(zhuǎn)移給臨近的分子：當(dāng)臨近的分子滿足發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的要求時，能量從熒光基團傳遞到臨近的分子。
當(dāng)某個熒光基團的發(fā)射譜與另一熒光基團的吸收光譜發(fā)生重疊，且兩個基團距離足夠近時，能量可以從短波長（高能量）的熒光基團傳遞到長波長（低能量）的熒光基團，這個過程稱為熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)，實際相當(dāng)于將短波長熒光基團釋放的熒光屏蔽。
熒光-PCR法區(qū)別于其他PCR法主要有以下優(yōu)點：
1.全封閉反應(yīng)，無需PCR后處理；
2.特異性強，靈敏度高；
3.采用對數(shù)期分析，摒棄終點數(shù)據(jù)，定量準(zhǔn)確；
4.定量范圍寬，可達到10個數(shù)量級；
5.儀器在線式實時監(jiān)測，結(jié)果直觀，避免人為判斷；
6.可實現(xiàn)一管雙檢或多檢；
7.操作安全，縮短時間，提高效率；
8.利于自動化和聯(lián)網(wǎng)管理。
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更新時間：2021-08-13
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